GM 501 Hyaluronidase

 

●GM501 Hyaluronidase    

Sperm hücresi kümülüslerden geçerek yumurtaya ulaşmak için Hyaluronidase enzimini salarak yolunu açar. GM501 Hyaluronidase yumurta hücresinin etrafındaki kümülüsleri, enzimatik olarak temizlemek ve spermin yumurtayı döllemesini kolaylaştırmak için kullanılır. GM501 Hyaluronidase kullanıma hazır bir medyumdur.

 

  Özellikler

 

pH  (37° C,% 6 CO2)

7,20 - 7,60

Osmolalitesi (mosmol / kg)

270 - 290

Sterilite

SAL10-3 (Sterilite Güvence Düzeyi)

Endotoksin (AB / ml)

<1.00

MEA (% 96 saat sonra blastosist)

≥ 80

 

Kompozisyon:

·                     GM501 Wash içinde çözünmüş ve sığır testis dokusundan izole edilmiş 80 IU/mL Hyaluronidase içerir.

Önerilen kullanım:

·                     GM501 Hyaluronidase kullanmadan önce 37°C ve % 5 - 7 CO2 olan atmosfer altında inkübe edilmelidir. GM501 Hyaluronidase 38 - 39 ° C sıcaklıkta ısıtılmamalıdır.

 

 Taze Yumurtaların Denudasyon İçin Hazırlığı

 

 400 µl  GM501 Wash

 400 µl    GM501 Wash

 400 µl Hyaluronidase

 

Dört Kuyucuklu Petride Hazırlama

10 yumurta kadar, bir adet 4 kuyucuklu bir petriyi aşağıdaki şemada olduğu gibi 1. Kuyucuğa 400 μl GYNEMED Hyaluronidase, 2. 3. ve 4. kuyucuğa GM501 Wash medyum koyarak hazırlayınız. 

 

Kuyucukları Gynemed GM501 Mineral Oil ile kaplayınız ve 37°C de  % 5  – 7 CO2 li ortamda 4 saat inkübe ediniz. 

 

60 mm’lik Petride Hazırlama

10 yumurtaya kadar, 60 mm’lik bir petriyi aşağıdaki şemada olduğu gibi 7 tane 80 μl lik HYA işlemi damlalarını hazırlayınız. Biri Hyaluronidase, diğerleri GM501 Wash damlalarıdır.

 

Bütün damlaları 9 – 10 μl  Gynemed Mineral Oil ile kaplayın ve 37°C de, % 5 – 7 CO2’ li ortamda 4 saat inkübe ediniz.

 

 

 

Mikro Damlacıklar ile Denudasyon Prosedürü.

1- Stereo Mikroskop altında petrinin içindeki taze yumurtaları inkübatörden dışarı alınız. 

2-Hazırlanan HYA işlemi petrisinin ortasına 10 kadar yumurtayı pipetleyin (50μl-100 μl ayarlı). Eğer 10 dan fazla yumurta varsa kalanları inkübatöre geri koyunuz.

3- Yumurtalardan 5 tanesini GM501Hyaluronidase damlasının içine koyunuz.

4- Hemen yumurtaları GM501 Hyaluronidase içinde beş on defa pipet ile çekip bırakarak, dışarı alınız.

5- Bu işlem ile kümülüs hücrelerden ayrılacak ve corona hücreleri ile çevrili olan yumurta  görünür olacaktır. 

 Not: Yumurtalar 30 saniyeden fazla Hyaluronidase solüsyonu içinde tutulmamalıdır.

6- Denuding pipeti (iç ölçüleri 135μm – 150μm) ile yumurtaları, sağındaki GM501 Wash içine taşıyınız.

7- Yumurtaları GM501 Wash içinde birkaç defa çekip bırakmak suretiyle yıkayınız.

8-  Bütün yumurtaları bir sonraki GM501 Wash damlasına koyunuz ve aynı işlemi corona hücreleri çıkarılıncaya kadar tekrarlayınız. 

9- Aynı işlemi, bir sonraki GM501 Wash damlasının içinde tekrarlayarak 4.GM501 Wash damlasına aktarınız.

10- Şimdi kalan diğer 5 yumurta için aynı işlemleri (4 -10) tekrarlayınız.

11- Bütün yumurtaları 4. damla içinde toplayıp, kümülüs ve corona hücrelerinden temizledikten sonra, onları son iki GM501 Wash damlaları içinde yıkayınız. Bu yumurtaları IVF veya ICSI işlemine kadar GM501 Culture içinde inkübe ediniz.

 

Medya